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Test ELISA

Le test ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) est un test de biochimie analytique qui utilise un immunodosage enzymatique en phase solide (EIA) pour détecter la présence d’une substance, généralement un antigène. Cette technique permet de détecter de très faibles quantités de substances.

L’analyte est immobilisé sur la surface d’une phase solide (généralement une microplaque) avec une liaison covalente ou à faible énergie. La phase solide peut être constituée par les parois du récipient (polymère) ou des anticorps adsorbés sur le polymère. La fixation de l’analyte à une phase solide permet le lavage du récipient pour éliminer les substances contaminantes puis à la fin d’amplifier la détection de l’analyte avec une réaction enzymatique.

ELISA Direct

Principe

1. Récipient vide (puits de microplaque)

2. L’analyte est ajouté et se lie à la phase solide

3. L’anticorps avec l’enzyme liée est ajouté. Le récipient est lavé pour éliminer les anticorps non liés.

4. Le substrat de l’enzyme est ajouté. Il est transformé par l’enzyme en un produit détectable (comme avec un spectrophotomètre par exemple). Comme l’enzyme peut transformer de nombreuses molécules de substrat, il y a ici une amplification de la détection.

ELISA compétitif

Principe.

1. L’antigène est fixé sur la phase solide

2. L’échantillon est ajouté au récipient (puits de la microplaque)

3. L’anticorps avec l’enzyme liée est ajoutée. Il existe une compétition entre l’antigène fixé à la phase solide et celui libre pour les anticorps. Le récipient est lavé pour éliminer les composants non fixés. Dans certains cas,l’anticorps avec l’enzyme conjuguée n’est pas disponible. Dans ce cas, un second anticorps avec l’enzyme liée est ajouté. Ce second anticorps se lie au premier anticorps.

4. Le substrat de l’enzyme est ajouté. Il est transformé par l’enzyme en un produit détectable (comme avec un spectrophotomètre). Comme l’enzyme peut transformer beaucoup de molécules de substrat, il y a ici une amplification de la détection.

Le dosage d’Aflatoxin est un bon exemple d’un tel test ELISA.

Le résultat peut être qualitatif (présence ou absence de l’analyte) ou quantitatif. Dans ce cas, une courbe d’étalonnage avec des concentrations d’analyte connues doit être déterminée (spectrophotomètre).